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Vérification de l'effet de stérilisation de l'autoclave

Connaissance technique 2019-04-04 10:04:45
Le stérilisateur à la vapeur à haute pression stérilise les articles pour répondre aux exigences de stérilité, ce qui constitue la garantie de base pour les expériences microbiennes. La qualification de la stérilisation en autoclave est la première étape la plus fondamentale et la plus critique du succès de l'expérience. À l'exception d'une petite quantité de milieu, qui n'a besoin que d'être chauffée et dissoute, et qui ne nécessite aucun autoclavage, la majeure partie du milieu est autoclavée à 121 ° C pendant 15 à 30 minutes. En particulier, la stérilisation du milieu de test stérile n’est pas complète et est directement liée aux résultats du test de stérilité effectué sur l’échantillon. Par conséquent, l'effet de stérilisation de l'autoclave doit être vérifié. À cette fin, nous fournissons une méthode simple et réalisable pour vérifier l’efficacité de la stérilisation.

1. Matériel de test

(1) Papier Bacillus stearothermophilus (un ensemble de tubes à essai commercialisé par la société 3M est également disponible). Bacillus stearothermophilus.

ATCC7053 est une bactérie indicatrice biologique couramment utilisée dans cette méthode, contenant une UFC / comprimé à 5 cellules.

(2) Carte d'indicateur chimique pour la stérilisation à la vapeur sous pression à 121 ° C (un ruban indicateur commun pour la stérilisation est également disponible).

(3) Le milieu aqueux à base de purpura d'eau bromocrésol a été autoclavé à 116 ° C pendant 20 minutes, puis utilisé (comme le tube à essai vendu par la société 3M, ce milieu ne peut pas être utilisé).

(4) Thermomètre résiduel à O-150 ° C (calibration requise par le bureau de métrologie).

2. Méthode et résultat

Le papier Bacillus stearothermophilus (appelé ci-après comprimé bactérien) a été placé dans une éprouvette scellée avec une pince stérile. La carte d’indicateur chimique et le thermomètre de mesure sont placés dans un tube à essai ouvert. Préparez 5-10 parties de chacun des deux tubes ci-dessus. Placez-les au port de vapeur de l'autoclave, au port d'échappement inférieur et à la sortie d'eau inférieure ou au centre des parties supérieure, inférieure, gauche et droite. Si le stérilisateur est au deuxième étage, vous devez mettre 10 places.

Le thermomètre restant peut être utilisé pour le test de vérification une fois qu'il a été normalisé. Avant de procéder aux tests, la colonne de mercure du thermomètre doit être brisée à une température inférieure à 40 ° C. La différence de température du thermomètre après chaque contrôle doit être comprise entre 1 ° C, ce qui indique que la distribution de la température à l'intérieur du stérilisateur est uniforme.

La plaque stérilisée doit être cultivée à une température comprise entre 56 et 60 ° C pendant 24 à 48 heures dans des conditions stériles d’asepsie et dans un milieu stérilisé à l’eau purine de bromocrésol stérilisée pour observer le changement de couleur. Si le milieu devient jaune, le B. stearothermophilus présent dans le comprimé n'est pas complètement inactivé, et la bactérie peut toujours se développer dans le milieu et le glucose est décomposé pour produire de l'acide en jaune. Si la couleur du support ne change pas, il reste violet, indiquant que les spores ont été inactivées. Au même moment, du papier non stérilisé était placé dans le support en tant que contrôle positif et un support vierge sans papier était utilisé en tant que contrôle négatif.

La couleur de l'indicateur sur la carte de l'indicateur chimique passe du jaune clair au noir pendant l'autoclavage. Au fur et à mesure que la couleur change de profondeur et comparée à la couleur de contrôle, il est possible de juger si l'effet de stérilisation répond aux exigences. La carte d'indicateur chimique doit être stockée dans un endroit sec. Il change de couleur lorsqu'il est exposé à l'humidité, ce qui affecte l'observation de l'effet de stérilisation.

La stérilisation à la vapeur à haute pression doit permettre à la vapeur de pénétrer dans le stérilisateur sans à-coups, d'entrer en contact avec les articles stérilisés et d'évacuer l'air froid d'origine pour obtenir l'effet de stérilisation. La répartition de la chaleur à vide et la vérification de la pénétration thermique à pleine charge doivent être effectuées (pas plus des 2/3 du volume total à pleine charge). Les deux vérifications ont été répétées trois fois pour un total de six fois.

Cinq points et six tests ont montré que la température était de 121 ° C, la carte d'indicateur chimique est devenue noire, le degré était conforme à la couleur de contrôle, le milieu n'a pas changé de couleur, ce qui indique que l'effet de stérilisation à la vapeur haute pression a été qualifié.

Les autoclaves sont des instruments puissants, mais les inspections rigoureuses ne sont qu'un examen des paramètres physiques de l'instrument. Par conséquent, le stérilisateur qui a été soumis à une inspection rigoureuse doit également vérifier l’effet de stérilisation. Certaines unités négligent souvent cette question importante. Dans les stérilisateurs portables domestiques, le pointeur de l'instrument atteint souvent la température requise, mais la température réelle de l'article stérilisé ne répond pas aux exigences. Le plomb dans les articles stérilisés n’est pas exhaustif, ce qui affecte les résultats de l’expérience. Le milieu n'est pas complètement stérilisé, ce qui affecte son utilisation et en juge les résultats. Par conséquent, la vérification de l'effet aseptique de l'autoclave est un problème qui doit être pris au sérieux.

Lorsque vous utilisez un stérilisateur à vapeur haute pression, veillez d'abord à éliminer l'air froid du stérilisateur lors de l'ouverture de la vapeur. L'évent doit être fermé avant que tout l'air froid de l'appareil ait été éliminé.

S'il reste de l'air dans le stérilisateur, le manomètre a atteint une certaine valeur de pression, mais la température à l'intérieur de l'appareil n'a pas atteint le degré correspondant. Plus il reste d'air, plus la différence entre les deux est grande, plus la température à l'intérieur de l'appareil est insuffisante et la stérilisation est incomplète. (De nombreuses personnes auront des bulles dans le petit cathéter lorsqu’elles seront stérilisées dans le milieu de fermentation. Il sera peut-être également possible d’essayer d’évacuer plus d’air froid du stérilisateur. Cela produira un effet miraculeux).

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