Méthode d'amplification :
PCR par fluorescence isotherme : Dans la PCR par fluorescence isotherme, l'amplification de l'ADN se produit à une température constante. Cela signifie que la réaction a lieu à une température unique et constante tout au long du processus.
PCR en temps réel : La PCR en temps réel, également connue sous le nom de PCR quantitative (qPCR), utilise un processus de cycle thermique. Cela implique plusieurs cycles de température, notamment des étapes de dénaturation, de recuit et d’extension. Ces cycles de température sont généralement contrôlés par une machine à cycleur thermique.
Contrôle de la température:
PCR à fluorescence isotherme : Comme son nom l'indique, la PCR à fluorescence isotherme maintient une température constante pendant la réaction, généralement autour de 60-65℃. Cela simplifie l’équipement nécessaire à la réaction par rapport à la PCR en temps réel.
PCR en temps réel : la PCR en temps réel implique un cycle thermique, dans lequel la température est modifiée de manière répétée entre différents niveaux (par exemple, dénaturation à environ 95 ℃, recuit à environ 55-65 ℃ et extension à environ 72 ℃). Cela nécessite un thermocycleur avec un contrôle précis de la température.
Méthode de détection :
PCR par fluorescence isotherme : La détection par fluorescence est utilisée à la fois dans la PCR par fluorescence isotherme et dans la PCR en temps réel. Cependant, dans la PCR par fluorescence isotherme, les signaux de fluorescence sont généralement détectés en continu sans qu’il soit nécessaire de passer d’une étape de température à une autre.
PCR en temps réel : Dans la PCR en temps réel, les signaux de fluorescence sont mesurés après chaque cycle de changement de température (généralement après l'étape de recuit/extension). Cela permet une surveillance en temps réel de l’amplification de l’ADN telle qu’elle se produit pendant le processus de cycle thermique.
Applications:
PCR par fluorescence isotherme : Cette technique convient à certaines applications, telles que les tests rapides au point d'intervention, où la simplicité et la rapidité sont essentielles. Il peut être utilisé pour la détection qualitative de séquences d’ADN spécifiques.
PCR en temps réel : La PCR en temps réel est largement utilisée pour l’analyse qualitative et quantitative de l’ADN. Il est très sensible et permet de mesurer la quantité initiale d’ADN dans un échantillon, ce qui le rend utile pour des applications telles que l’analyse de l’expression génique, la quantification de la charge virale et le génotypage.
En résumé, la principale différence entre la PCR par fluorescence isotherme et la PCR en temps réel réside dans la méthode de contrôle de la température et d’amplification. La PCR par fluorescence isotherme maintient une température constante tout au long de la réaction et convient à des applications plus simples et rapides, tandis que la PCR en temps réel implique un cycle thermique et est utilisée pour une large gamme d'applications d'analyse quantitative et qualitative de l'ADN.
