I. Qu'est-ce qu'un flacon de culture cellulaire ?
Un flacon de culture cellulaire est un instrument de laboratoire courant utilisé pour la culture cellulaire. Fabriqué en polystyrène (PS) de haute qualité, il est produit à l'aide de moules ultra-précis et selon des processus de production entièrement automatisés. Ce produit est utilisé pour la culture cellulaire en laboratoire ; ses excellentes propriétés optiques facilitent l'observation microscopique, et sa surface est traitée TC pour une meilleure adhésion cellulaire.
II. Inoculation de la suspension cellulaire dans le flacon de culture
1. Préparation de la suspension cellulaire : Préparer la suspension cellulaire selon la concentration expérimentale requise et la mélanger soigneusement dans un flacon de culture, un récipient de culture ou tout autre contenant.
2. À l'aide d'une pipette ou d'une pipette Pasteur, injectez lentement et régulièrement la suspension cellulaire dans le flacon de culture cellulaire, en évitant les éclaboussures et la formation de mousse. (Pour les flacons de culture cellulaire multicouches, une attention particulière doit être portée à la répartition uniforme du liquide ; incliner ou faire tourner le flacon peut faciliter l'écoulement régulier du liquide dans chaque couche.)
3. Déposez délicatement le flacon de culture sur une surface de travail stable, en veillant à ce que la face lisse et plane soit orientée vers le haut et la face à gradient vers le bas (conception empilable pour une manipulation aisée).
4. Placez le flacon de culture cellulaire dans un incubateur adapté et réglez la température (par exemple, 37 °C), l'humidité et la concentration de gaz (par exemple, 5 % de CO₂) appropriées.
5. Laissez les cellules se développer dans le flacon de culture pendant une durée déterminée.
III. Changement du milieu de culture
1. Élimination du milieu de culture usagé : Lors de l’aspiration du milieu de culture, inclinez le flacon à 45° de façon à ce que la face lisse soit tournée vers vous. Aspirez délicatement le milieu de culture usagé à l’aide d’une pipette Pasteur ou d’une pipette classique, en veillant à ne pas déloger les cellules adhérentes. Si le milieu de culture contient de nombreuses cellules en suspension ou des impuretés, lavez les cellules une ou deux fois avec du tampon PBS pour éliminer ces impuretés.
2. Ajout de milieu de culture neuf : Après avoir éliminé le milieu de culture usagé, ajoutez la quantité appropriée de milieu de culture dans le flacon. Versez le milieu par la paroi du flacon afin d’éviter tout contact direct avec les cellules adhérentes. La quantité de milieu de culture frais ajoutée doit être déterminée en fonction de la densité cellulaire et du taux de croissance pour assurer une croissance cellulaire normale.
IV. Collecte des cellules
1. Élimination du milieu de culture usagé : Aspirer délicatement le milieu de culture usagé du flacon de culture cellulaire, ajouter une quantité appropriée de tampon PBS et agiter doucement pour éliminer tout résidu de milieu de culture, en veillant à ce que la surface cellulaire soit propre.
2. Digestion et arrêt de la digestion cellulaire : Ajouter une quantité appropriée de trypsine (≥ 3 ml) et digérer pendant 2 à 3 minutes, puis arrêter la digestion avec du milieu de culture contenant du sérum.
3. Collecte des cellules : Transférer la suspension cellulaire dans un tube à centrifuger à l’aide d’une pipette (en évitant la formation de mousse) et centrifuger à une vitesse appropriée (par exemple, 800 tr/min) pendant 5 minutes pour permettre aux cellules de se déposer au fond du tube.
4. Récupération du culot cellulaire : Après centrifugation, éliminer délicatement le surnageant du tube (ne pas jeter le culot cellulaire). Récupérer le culot cellulaire et procéder aux étapes suivantes nécessaires à l’expérience.