Réactifs courants en culture cellulaire
Lorsque des cellules ou des tissus animaux quittent l'organisme pour être cultivés à l'extérieur de l'organisme, il est nécessaire de leur apporter divers nutriments nécessaires à la croissance et divers réactifs nécessaires à une meilleure croissance cellulaire in vitro. Dans ce numéro, je présenterai brièvement certains composants réactifs utilisés dans le processus de culture cellulaire et leurs fonctions.
1. Composition du milieu de culture cellulaire
(1). Milieu de culture de base
Les milieux basaux courants comprennent principalement le MEM, le DMEM et le RPMI, qui fournissent principalement des systèmes tampons comprenant du glucose, des acides aminés, de l'eau, des oligo-éléments et du bicarbonate de sodium.
● Glutamine
C'est un acide aminé essentiel nécessaire à la croissance cellulaire et participe à la synthèse des protéines et au métabolisme des acides nucléiques.
● Indicateur rouge de phénol
Indicateur acide-base couramment utilisé, il est jaune lorsqu'il est acide, rouge lorsqu'il est neutre et violet lorsqu'il est alcalin. Le rouge de phénol est utilisé comme indicateur de la valeur du pH dans le milieu.
● Système de tampon carbonate/PH
Un système tampon de pH physiologique. En raison de la production d'acide au cours du métabolisme cellulaire, le HCO3- dans le milieu sera progressivement consommé, de sorte que le CO2 doit être reconstitué à temps pour maintenir le pH dans une certaine plage.
(2).Sérum animal
Ajouter 2 à 20 % de sérum au milieu de base pour former un milieu complet. Le sérum peut non seulement fournir aux cellules les nutriments de base nécessaires à la croissance, mais également contenir des composants importants impliqués dans le métabolisme cellulaire tels que les facteurs de croissance, les hormones, les oligo-éléments et les ions.
(3). Antibiotiques
Afin d'éviter que les cellules ne soient contaminées pendant le processus de culture, un mélange pénicilline-streptomycine est généralement ajouté au milieu complet, c'est-à-dire un double anticorps. La pénicilline est principalement efficace contre les bactéries Gram-positives et la streptomycine est efficace contre de nombreuses bactéries Gram-négatives. .
2. Trypsine-EDTA
La trypsine peut hydrolyser la protéine entre les cellules, puis séparer les cellules. L'EDTA est un agent chélateur chimique à faible toxicité et a un effet discret sur les cellules adhérentes. Lorsque les deux sont utilisés en combinaison, l'efficacité des cellules de dispersion est plus élevée. Cette étape s'appelle les cellules digestives. Pour différentes cellules, il existe différentes exigences en matière de température, de temps et de concentration de trypsine lorsqu'elle est utilisée. Si la digestion est insuffisante, les cellules ne peuvent pas être digérées et une digestion excessive endommagera les cellules. Étant donné que le sérum dans le milieu peut réduire l'activité de la trypsine, le milieu complet est généralement utilisé pour terminer la digestion cellulaire.
3. Tampon PBS
Le PBS est une solution saline tamponnée au phosphate avec un équilibre salin et un effet tampon de pH réglable. Il est généralement utilisé pour laver les cellules et maintenir la pression osmotique cellulaire.
4. Diméthylsulfoxyde (DMSO)
Un protecteur cellulaire pénétrant important et un composant important dans le liquide de cryoconservation cellulaire. Pendant le processus de cryoconservation des cellules, le DMSO peut rapidement pénétrer la membrane cellulaire et pénétrer dans la cellule, abaisser le point de congélation, retarder le processus de congélation, augmenter la concentration d'ions dans la cellule, réduire la formation de cristaux de glace dans la cellule et réduire la cellule dommage.
5. Inhibiteurs des mycoplasmes
La contamination par les mycoplasmes est une source courante de contamination dans le processus de culture cellulaire. Cependant, les inhibiteurs de mycoplasmes peuvent être utilisés pour éliminer les mycoplasmes dans le liquide cellulaire au stade initial de la contamination, afin que l'expérience puisse se poursuivre.
6. Colorant bleu trypan
Un réactif de coloration biologique couramment utilisé pour détecter l'intégrité de la membrane cellulaire. En raison de la perte d'intégrité de la membrane cellulaire et de la perméabilité accrue, les cellules mortes peuvent être colorées en bleu par le bleu trypan, tandis que les cellules vivantes ne seront pas colorées car elles ont des membranes cellulaires intactes qui peuvent empêcher le bleu trypan d'entrer dans la cellule. Les cellules vivantes et mortes peuvent être distinguées par la couleur des cellules au microscope, ce qui est pratique pour le comptage des cellules vivantes.
